1、GFP-Trap®可识别的 GFP 衍生物类型有哪些?

(1) eGFP, wtGFP, GFP S65T

(2) TagGFP

(3) eYFP, YFP, Venus, Citrin

(4) CFP

不能识别：TurboGFP，所有的 RFPs

　　2、RFP-Trap®可识别的 RFP 衍生物类型有哪些?

(1) mRFP

(2) mCherry

(3) mOrange

(4) mPlum

(5) mRuby

(6) mKate2

不能识别：DsRed、mRFPruby、TagRFP、所有 GFPs

3、Nano-Trap® (GFP-Trap® / RFP-Trap®) 的结合能力如何?

Nano-Trap®的结合能力取决于珠子。每 10μL 浆液，琼脂糖珠可结合 2~3μg GFP，磁性颗粒可结合 0.25-~0.5μg GFP。

4、可以从 GFP-Trap 洗脱结合蛋白么?

关于定量洗脱，可以将样品至于 SDS 上样缓冲液中 95℃煮 10min(详见 protocol)，或者在 0.2 M 的 甘氨酸(pH2.5)中孵化 0.5~2min，随后用 0.1 体积的 1M Tris 碱中和。

5、是否可以从 GFP-Trap 洗脱出自然状态的结合蛋白，比如，在凝胶迁移实验或功能分析实验中?

可以尝试洗脱游离的 GFP。但是，请注意，这种方法，不能定量洗脱出目标融合蛋白。

　　6、怎样才能避免非特异性的蛋白与 GFP-Trap 交互作用而结合?

关键操作步骤，是在孵化液中稀释洗涤剂的浓度。我们建议，洗涤剂为终浓度 0.1%(如 NP-40 或 TX-100)，

且最终体积不少于 0.4mL。另外，我们建议，要测定各种洗涤缓冲液的盐浓度，使其范围在 150mM-500mM

范围内，以去除非特异性结合的亲水性蛋白。

7、在 binding 过程中，N-端与 C-端 GFP 融合蛋白之间是否存在差异?

GFP-Trap®对 C-末端的 GFP 融合蛋白的亲和力稍高，若要消除这种差异，可以加长孵化时间(1-2h 取 代 15-30min)

8、是否可以在组织样品(即变性缓冲液)中直接纯化 GFP 标记的融合蛋白?

原则上，GFP-Trap®即使在恶劣的缓冲条件下(如，RIPA 缓冲液，含 0.1%SDS 或 1M 尿素)，也非常 稳定。

9、可结合的 GFP-Trap®珠的 GFP 结构，是否有大小限制?

无。

10、如果在洗脱液中，有剩余的背景怎么办?

建议使用 Chromotek 的 blocked particles(bab-20 or bmp-20)对样品进行预处理。